极品人妻淫玩弄人妻av,日韩欧美国产精品一区二区三区,欧美日韩第二页,亚洲无码视频1区

不同非洲豬瘟病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法的對(duì)比

一、簡(jiǎn)介

非洲豬瘟（Africann Swine Fever, ASF）是由非洲豬瘟病毒科非洲豬瘟病毒（African Swine Fever Virus，ASFV）感染引起的家豬和野豬的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病¹。臨床癥狀與豬瘟極其相似，以高熱、皮膚發(fā)紺、內(nèi)臟器官嚴(yán)重出血、呼吸障礙和神經(jīng)癥狀為主要特征。本病傳播快、致死率高，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)危害巨大，是我國(guó)一類動(dòng)物疫病和世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）規(guī)定的必須報(bào)告的動(dòng)物疫病，受到世界各國(guó)的高度重視²。本病是以節(jié)肢動(dòng)物作為傳播媒介的DNA病毒。ASF已在非洲、歐洲和美洲等幾十個(gè)國(guó)家暴發(fā)，“三全水餃?zhǔn)录?rdquo;則將非洲豬瘟直接推向大眾的面前。目前，本病尚無有效的預(yù)防疫苗和治療藥物，防止疫情擴(kuò)大的有效措施就是撲殺。因此事先建立簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確的ASFV檢測(cè)方法顯得十分必要。本文就ASFV實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的不同方法，進(jìn)行對(duì)比分析。

二、檢測(cè)方法

2.1 血清學(xué)檢測(cè)方法

2.1.1酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

ELISA利用抗原抗體進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)，應(yīng)用于血清抗體的檢測(cè)，適用于大批量樣品的檢測(cè)。ASFV含有約150種蛋白，目前國(guó)內(nèi)外常用作檢測(cè)抗原的蛋白有VP73、VP72、P54、P32、P30等³。

優(yōu)點(diǎn)：快速、方便。

缺點(diǎn)：（1）一般情況下, 非洲豬瘟病毒進(jìn)入豬體內(nèi)， 7天后才能誘導(dǎo)產(chǎn)生較高的Ig G抗體，而7天的時(shí)候，足以出現(xiàn)早期臨床癥狀，并已經(jīng)傳染給其他家豬，因此該檢測(cè)方法往往具有難以解決的滯后性。（2）針對(duì)不同蛋白會(huì)出現(xiàn)個(gè)別差異，增加排查的難度³。

2.1.2膠體金免疫層析（GICA）試紙條

運(yùn)用雙抗體夾心法原理純化后的抗ASFV單克隆抗體制備金標(biāo)抗體, 應(yīng)用于檢測(cè)ASFV的膠體金免疫層析試紙條，也稱為檢測(cè)卡。

優(yōu)點(diǎn)：使用方便；

缺點(diǎn)：（1）靈敏度低；（2）一般情況下, 非洲豬瘟病毒進(jìn)入豬體內(nèi)， 7天后才能誘導(dǎo)產(chǎn)生較高的Ig G抗體，而7天的時(shí)候，足以出現(xiàn)早期臨床癥狀，并已經(jīng)傳染給其他家豬，因此該檢測(cè)方法往往具有難以解決的滯后性³。

2.1.3熒光抗體試驗(yàn)（FAT）

熒光抗體試驗(yàn)（FAT）可用于檢測(cè)野外可疑豬或?qū)嶒?yàn)室接種豬的脾、淋巴結(jié)等組織壓片和冰凍切片中的ASFV抗原。

優(yōu)點(diǎn)：敏感性和特異性較佳；

缺點(diǎn)：需要專業(yè)試驗(yàn)人員，同時(shí)需要熒光顯微鏡及高質(zhì)量的熒光標(biāo)記抗體。因此僅作為ASFV的輔助檢測(cè)方法⁴。

2.1.4免疫組化法

該方法用來檢測(cè)急性感染ASFV豬的扁桃體組織病理學(xué)變化，通過檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，感染ASFV豬有出血、單核細(xì)胞增多現(xiàn)象。免疫組化法對(duì)于臨床癥狀不明顯的病例，確診有一定難度，因此，該方法僅作為ASFV的輔助檢測(cè)方法。

優(yōu)點(diǎn)：特異性較佳；

缺點(diǎn)：對(duì)于臨床癥狀不明顯的病例，確診有一定難度⁴。

2.2分子生物學(xué)檢測(cè)方法

2.2.1 PCR

體外擴(kuò)增基因的一種方法，是目前ASFV常用的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法。研究表明，非洲豬瘟感染8小時(shí)， 便可從血液中檢測(cè)到其核酸物質(zhì)，因此針對(duì)非洲豬瘟病毒保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物，對(duì)采集的血液或組織病料等相關(guān)物質(zhì)進(jìn)行DNA提取，進(jìn)行PCR反應(yīng)，可對(duì)其進(jìn)行快速準(zhǔn)確診斷。是目前ASFV常用的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法。眾多國(guó)內(nèi)外研究^5-9均建立了ASFV的PCR檢測(cè)方法，表明該方法具有良好的敏感性和特異性，且可以檢測(cè)出極低含量的ASFV，為ASFV早期感染的快速診斷提供了有效的分子生物學(xué)檢測(cè)方法。

優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)單快速、靈敏度高和特異性強(qiáng)。

2.2.2 熒光定量PCR

通俗講是PCR的升級(jí)版。實(shí)時(shí)熒光定量PCR比常規(guī)PCR具有更高的敏感性和特異性，可同時(shí)快速檢測(cè)大批量樣品，其更加敏感、準(zhǔn)確。舉例，McKillen等¹⁰（2010）根據(jù)9GL基因建立了MGB探針實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法，低可以檢測(cè)到20拷貝標(biāo)準(zhǔn)DNA。

優(yōu)點(diǎn)：敏感性和特異性高。

2.2.3 探針雜交技術(shù)

能有效排除PCR檢測(cè)過程中的非特異性結(jié)果， 省去了瓊脂糖凝膠電泳步驟，操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)迅速，在酶標(biāo)板中可批量反應(yīng)，為ASFV核酸檢測(cè)方法開辟了新的途徑，

該方法的建立難度較高、操作較繁瑣， 對(duì)實(shí)驗(yàn)人員技術(shù)水平要求較高。

三、小結(jié)

• 目前，ASFV的檢測(cè)技術(shù)主要有針對(duì)病毒DNA的核酸檢測(cè)技術(shù)和基于病毒抗原、抗體反應(yīng)的免疫學(xué)技術(shù)兩大類。
• OIE推薦檢測(cè)ASFV的方法主要有PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、ELISA等。用免疫學(xué)方法檢測(cè)抗體可以了解ASFV感染、發(fā)生、發(fā)展的進(jìn)程，但抗體只有在病毒感染至一定時(shí)期后才會(huì)出現(xiàn)，故ELISA等抗體檢測(cè)方法存在一定的局限性和滯后性。
• PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR等分子生物學(xué)技術(shù)在豬感染ASFV的早期即可檢測(cè)到病毒核酸，在ASFV的早期檢測(cè)中具有重要作用。
• 總之，ASFV的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法多種多樣，但若要求檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、快速、敏感，我們推薦PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法，這不僅對(duì)感染ASFV的動(dòng)物治療非常重要，而且對(duì)未感染的動(dòng)物及時(shí)采取有效的預(yù)防措施同樣具有重要的意義。

• 隨著免疫學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，ASFV的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法必將不斷完善，進(jìn)一步為我國(guó)開展ASF的監(jiān)測(cè)與綜合防控提供技術(shù)支持。

【參考文獻(xiàn)】

1. 常華, 花群義, 段綱, 項(xiàng)勛, 曾昭文. 非洲豬瘟的研究進(jìn)展. 中國(guó)畜牧獸醫(yī) 2007; 34 (1):116-118.

2. 王君瑋, 張玲, 王志亮, 王華, 包靜月. 非洲豬瘟傳入我國(guó)危害風(fēng)險(xiǎn)分析. 中國(guó)動(dòng)物檢疫 2009; 26 (3):63-66.

3. 常華, 花群義, 段綱. 非洲豬瘟病毒的分子生物學(xué)研究進(jìn)展. 微生物學(xué)通報(bào) 2007; 34 (3):572-575.

4. 莊金秋, 梅建國(guó), 謝金文, 李峰, 沈志強(qiáng). 非洲豬瘟病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法研究進(jìn)展. 飼料與畜牧 2017;  (22).

5. Agüero M, Fernández J, Romero L, Sánchez MC, Arias M, Sánchezvizcaíno JM. Highly Sensitive PCR Assay for Routine Diagnosis of African Swine Fever Virus in Clinical Samples. Journal of Clinical Microbiology 2003; 41 (9):4431.

6. 曾少靈, 花群義, 張彩虹, 曹琛福, 秦智鋒, 阮周曦, et al. 非洲豬瘟病毒PCR檢測(cè)方法的建立. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展 2009; 30 (10):6-10.

7. Agüero M, Fernández J, Romero LJ, Zamora MJ, Sánchez C, Belák S, et al. A highly sensitive and specific gel-based multiplex RT-PCR assay for the simultaneous and differential diagnosis of African swine fever and Classical swine fever in clinical samples. Veterinary Research 2004; 35 (5):551-563.

8. 非洲豬瘟病毒和古典豬瘟病毒雙重PCR及雙重?zé)晒釶CR檢測(cè)方法的建立與應(yīng)用. 揚(yáng)州大學(xué); 2010.

9. Basto AP, Portugal RS, Nix RJ, Cartaxeiro C, Boinas F, Dixon LK, et al. Development of a nested PCR and its internal control for the detection of African swine fever virus (ASFV) in Ornithodoros erraticus. Archives of Virology 2006; 151 (4):819-826.

10. Mckillen J, Mcmenamy M, Hjertner B, Mcneilly F, Uttenthal Å, Gallardo C, et al. Sensitive detection of African swine fever virus using real-time PCR with a 5′ conjugated minor groove binder probe. Journal of Virological Methods 2010; 168 (1):141-146.